广州劢博仪器有限公司
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博日食品厂荧光定量PCR的行业须知
发布时间:2020-07-09







广州劢博仪器有限公司产品服务包括:非洲病毒检测、核酸提取纯化、PCR、荧光定量PCR、检测、非洲检测、全自动核酸提取纯化系统、病毒核酸提取系统、非洲病毒快速检测试剂盒。根据其使用范围可以分为两类,一种是大型核酸提取仪,另一种是小型核酸提取仪。我们的客户对象是食品企业/公司/厂、食品加工企业/公司/厂、冷冻食品加工企业/公司/厂、养殖场、养猪场、屠宰场、生猪屠宰场。

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一、在动物检疫中对生猪及其产品开展非洲病毒检测,应当使用我部批准或经中国动物疫病预防控制中心比对符合要求的检测方法及检测试剂盒(试纸条),确保检测结果准确。广州劢博--养殖场核酸提取纯化传统的PCR定量是应用终点PCR来对样品中的模板量进行定量,通常用凝胶电泳分离,并用荧光染色来检测PCR反应的Zui终扩增产物。符合要求的检测方法及检测试剂盒(试纸条)可从中国动物疫病预防控制中心网站查询。二、应急期间,比对符合要求的检测试剂盒(试纸条)可使用至2019年6月30日。三、各地畜牧兽医管理部门要加强对非洲病毒检测试剂盒(试纸条)生产企业及其产品质量监管,确保产品质量符合要求。


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猪肉制品加工企业在生猪产品原料中检出非洲病毒核酸阳性的,应当立即封存阳性样品的同批次原料并报告所在地市场监管、畜牧兽医部门,并将阳性样品送至具有检测资质的单位复检。在real-time技术的发展过程中,两个重要的发现起着关键的作用:(1)在90年代早期,TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的发现,它能降解特异性荧光记探针,因此使得间接的检测PCR产物成为可能。复检为阳性的,企业要在当地市场监管、畜牧兽医部门监督下,按规定对同批次生猪产品原料进行无害化处理,对相关场所进行彻i底清洗消毒。


广州劢博仪器有限公司产品服务包括:非洲病毒检测、核酸提取纯化、PCR、荧光定量PCR、检测、非洲检测、全自动核酸提取纯化系统、病毒核酸提取系统、非洲病毒快速检测试剂盒。PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。我们的客户对象是食品企业/公司/厂、食品加工企业/公司/厂、冷冻食品加工企业/公司/厂、养殖场、养猪场、屠宰场、生猪屠宰场。

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荧光定量PCR样品RNA的抽提①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。因为病原体往往附着于其他物质上面或中间,消毒i药与病原接触需要先渗透,而渗透则需要时间,有时时间会很长。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯i仿,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯i仿相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。

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近年来,分子遗传学诊断技术发展迅速,荧光定量PCR(QF-PCR)技术、荧光原位杂交(FISH)技术、多重连接探针扩增(MLPA)技术、实时荧光PCR技术、染色体微阵列分析(CMA)技术、产前液相芯片(BoBs)技术、无创性产前基因检测(NIPT)等已逐渐成熟,并开始向临床转化。但在许多情况下,研究者们已不再满足于得知某一特异DNA序列的存在与否,他们更着眼于对其进行精i确的核酸定量。分子遗传学诊断技术多以遗传物质DNA为检测对象,不需要进行细胞培养,为传统的细胞染色体核型分析技术提供了有效的补充。


广州劢博仪器有限公司产品服务包括:非洲病毒检测、核酸提取纯化、PCR、荧光定量PCR、检测、非洲检测、全自动核酸提取纯化系统、病毒核酸提取系统、非洲病毒快速检测试剂盒。另外,荧光定量PCR的结果无需通过琼脂糖凝胶电泳来评估,大大节省实验时间,提高实验效率。我们的客户对象是食品企业/公司/厂、食品加工企业/公司/厂、冷冻食品加工企业/公司/厂、养殖场、养猪场、屠宰场、生猪屠宰场。

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一般猪场而言,只需配备非洲快速检测试纸条,根据猪场规模配备10-50条即可,场里有异常波动,就可以及时现场检测。专门的热循环仪配备荧光检测模块,用于监测扩增时的荧光,检测到的荧光信号反映了每个循环扩增产物的量。一定注意取样方法及注意事项,注意消毒。如果不幸检测到疑是非洲阳性的样本,建议再反复多卡检测看看,基本上可以做到百i分百准确率。要是不放心,再送检相关部分去做PCR检测。猪场一线需要快速检测技术以尽早确诊,做到早处理、早隔离,但要明确的是,猪场只需要通过合适的检测工具,帮助“定性”即可,不需要深入定量分析,有问题直接捕杀无害化处理。

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磁珠法核酸提取,具有传统DNA提取方法无法比拟的优势,主要体现在:①能够实现自动化、大批量操作,符合生物学高通量的操作要求,使得传i染性疾病爆发时能够进行快速及时的应对,这一特点使得传统方法望尘莫及;②操作简单、用时短,整个提取流程只有四步,大多可以在36-40分钟内完成;③安全无毒,不使用传统方法中的氯i仿等有毒试剂,对实验操作人员的伤害减少到少,完全符合现代环保理念;④磁珠与核酸的特异性结合使得提取的核酸纯度高、浓度大。按照生猪屠宰检疫规程和相关规定,屠宰检疫内容包括传i染病和寄i生虫病,检疫流程包括生猪进入屠宰厂(场、点)监督查验、检疫申报、宰前检查、同步检疫、检疫结果处理以及检疫记录等。


广州劢博仪器有限公司产品服务包括:非洲病毒检测、核酸提取纯化、PCR、荧光定量PCR、检测、非洲检测、全自动核酸提取纯化系统、病毒核酸提取系统、非洲病毒快速检测试剂盒。广州劢博--屠宰场荧光定量PCR扩增序列特异性检测方法是在PCR反应中利用标记荧光染料的基因特异寡核苷酸探针来检测产物,它又可分为直接法和间接法。我们的客户对象是食品企业/公司/厂、食品加工企业/公司/厂、冷冻食品加工企业/公司/厂、养殖场、养猪场、屠宰场、生猪屠宰场。

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随着定量PCR仪设计上的不断改进,对温度控制的精密性越来越高,出现了像Rotor-Gene这样的管间温度均一性达±0.01℃的定量PCR仪,而该公司新近推出的Rotor-Gene6000更可达到±0.02℃的温度分辨率。常规PCR中,扩增产物(扩增子)是通过终点法来分析检测,即PCR反应结束后,DNA通过琼脂糖凝胶电泳,然后进行成像分析。温度上的高分辨率使得运用定量PCR仪进行高分辨率熔解曲线(HRM)分析基因型成为可能。高分辨率熔解曲线根据序列长度、GC含量和互补性分析样品。不同的核酸序列,哪怕仅有一个碱基的差异,也会体现在熔解温度的差别上。

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PCR是1985年开始出现的一项基因检测技术,由于PCR技术具有简便易行、灵敏度高等优点,该技术被广泛应用于基础研究,成为分子生物学必不可少的研究工具。广州劢博--养殖场荧光定量PCR相对常规PCR而言,荧光定量PCR的主要优点是准确地确定初始模板拷贝数和宽的动态范围内和高的灵敏度。但在许多情况下,研究者们已不再满足于得知某一特异DNA序列的存在与否,他们更着眼于对其进行精i确的核酸定量。因而,借助PCR对基因快速、敏感、特异而准确的定量成为目前分子生物学技术研究的热点之一。实时荧光定量PCR( real-time PCR, RQ PCR)技术实现了PCR从定性到定量的飞跃,它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为分子生物学研究中的重要工具。


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