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博日养猪场核酸提取纯化优选企业
发布时间:2020-07-08







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一般而言,荧光扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段,荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖, 无法判断产物量的变化。而在平台期,扩增产物已不再呈指数级的增加,PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系,根据终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。我们的客户对象是食品企业/公司/厂、食品加工企业/公司/厂、冷冻食品加工企业/公司/厂、养殖场、养猪场、屠宰场、生猪屠宰场。只有在荧光信号指数扩增阶段, PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系,我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便,在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念:荧光阈值和 CT值.

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什么是荧光定量PCR?常规PCR中,扩增产物(扩增子)是通过终点法来分析检测,即PCR反应结束后,DNA通过琼脂糖凝胶电泳,然后进行成像分析。而荧光定量PCR可以在反应进行过程中进行累积扩增产物的分析和检测,即“实时”。在反应体系中加入荧光分子,通过荧光信号的按比例增加来反应DNA量的增加,使PCR产物的实时检测成为可能。满足实验目的的荧光化学物质包括DNA结合染料和荧光标记的序列特异引物或探针;专门的热循环仪配备荧光检测模块,用于监测扩增时的荧光,检测到的荧光信号反映了每个循环扩增产物的量。如测定病i人样本中病原体的含量、实验样本中某一特定的mRNA的含量等。


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生猪屠宰企业作为产业链条上的重要主体,防控动物疫病、保证产品质量安全是应尽的责任。屠宰厂(场)生产设施设备和环境一旦被污染,病毒更易长期存活,更易在生猪和猪肉产品中循环扩增,成为病毒的“储存器”“扩增器”。生猪屠宰厂(场)连接着生猪产销等上下游环节,便于“顺藤摸瓜”及时发现和追溯潜在风险。温度上的高分辨率使得运用定量PCR仪进行高分辨率熔解曲线(HRM)分析基因型成为可能。相比其他环节,在生猪屠宰厂(场)开展检测更容易采集样品,实现i大限度的检测覆盖面,结合临床和剖检情况综合判断。从目前情况看,大部分屠宰厂(场)能够开展非洲病毒自检。

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对检测的要求是:生猪屠宰厂(场)应当在驻场官i方兽医监督下,按照生猪不同来源实施分批屠宰,每批生猪屠宰后,对暂储血液进行取样并检测非洲病毒;或者根据实际情况,在生猪进场前以生猪运输车辆为单位采集全部生猪血液样品,混合后进行检测。屠宰过程中发现疑似非洲典型病变的,要立即停止屠宰,将可i疑生猪转至隔离间,并采集病变组织和血液样品进行检测。Ct值的含义是:每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。对检测结果应用的要求是:屠宰厂(场)检测非洲病毒为阴性且按照检疫规程检疫合格的,驻场官i方兽医方可出具动物检疫证明,并注明检测方法、日期和结果等信息。


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FQ-PCR在医学栓测中有价值的应用领城就是对感i染性疾病的诊斷,只要有限的核酸序列清楚,运用FQ-PCR技术,检测任何病原体。目前,对一些培养周期长或缺乏稳定可靠的检测手段的病原体,可以考虑用FQ-PCR检测,为临床诊断提供依据FQ-PCR对病原体的检测克服了免i疫学检測的“窗口期“问题,可判断疾病是否隐性或亚临床状态。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,因此只要获得未知样品的Ct值,即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。FQ-PCR技术可以应用于肿癟的研究及诊断。

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实时荧光定量PCR的基本原理:理论上,PCR过程是按照2n(n代表PCR循环的次数)指数的方式进行模板的扩增。但在实际的PCR反应过程中,随着反应的进行由于体系中各成分的消耗(主要是由于聚合酶活力的衰减)使得靶序列并非按指数方式扩增,而是按线性的方式增长进入平台期。因此在起始模板量与终点的荧光信号强度间没有可靠的相关性。因为八联管你需要盖上盖子,而且盖子比较的难按下去,稍不慎就把八联管弄断或者液体撒出来。如采用常规的终点检测法(利用EB染色来判断扩增产物的多少,从而间接的判断起始拷贝量),即使起始模板量相同经PCR扩增、EB染色后也完全有可能得到不同的终点荧光信号强度。



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